양, 유방암, 정소암, 전립선암 등 각종 암에 대한 강력한 항종양 효과를 기대할 수 있다.

특허 설명:

본 발명은 암 유전자 치료약 및 동치료약을 이용한 암 유전자 치료 방법에 관한 것이다.

각종 세포주를 캐리어 세포로 이용했을 경우의 난소암 세포 HEY에 대한 증식 억제 효과를 IC50에서의 세포수로 조사한 결과를 나타내는 그래프이다.

온콜리틱 바이러스 단독의 경우와 캐리어 세포를 이용했을 경우에서, 바이러스 항체 존재 하, 난소암 세포 HEY에 대한 증식 억제 효과를 IC50에서의 항아데노 바이러스 항체의 항체값으로 조사한 결과를 나타내는 그래프이다.

온콜리틱 아데노 바이러스 감염 293 세포 등에 대해, 바이러스 항체 존재하의 난소암 세포 HEY에 대한증식 억제 효과를 IC50에서의 항아데노 바이러스 항체의 항체값으로 조사한 결과를 나타내는 그래프이다.

293 세포, A549 세포, SW626 세포, HT-3 세포의 각 캐리어 세포에 대해, 바이러스 항체 존재하의 난소암세포 HEY에 대한 증식 억제 효과를 세포수로 조사한 결과를 나타내는 그래프이다.

누드마우스의 피하에 사람 난소암 세포 RMG-1을 이식하여 형성된 10 내지 15㎜의 거대 종양 모델을 이용하여, 본 발명의 암 유전자 치료약의 in vivo 항종양 효과를 검토한 결과를 나타내는 그래프이다.

누드마우스의 피하에 사람 난소암 세포 PA-1을 이식하여 형성된 10 내지 15㎜의 거대 종양 모델을 이용하여, 본 발명의 암 유전자 치료약의 in vivo 항종양 효과를 검토한 결과를 나타내는 그래프이다.

면역 기능이 정상적인 피하 종양 모델 마우스((C57BL/6×C3/He)F1 마우스)를 이용하여 본 발명의 암 유전자 치료약의 in vivo 항종양 효과를 검토한 결과를 나타내는 그래프이다.

아데노 바이러스 투여에 의한 A549 세포의 세포 융합을 현미경에 의해 관찰한 도면이다.

컨트롤로서, 아데노 바이러스를 투여하지 않은 A549 세포를 현미경에 의해 관찰한 도면이다.

(a)는 1∼21의 사람 수술 표본에서의 미드카인(MK) mRNA의 발현을 RT-PCR로 검토한 결과, (b)는 마찬가지의 방법에 의해 악성 신경교종(glioma)의 4개의 세포주에서의 미드카인 mRNA의 발현을 RT-PCR로 검토한 결과, (c)는 상기 각 세포주에서의 미드카인의 발현을 웨스턴 블롯 해석에 의해 검토한 결과이다.

길이가 상이한 2개의 미드카인 프로모터를 이용하여 상기 각 세포주에서의 프로모터 활성을 비교한 결과를 나타내는 그래프이다.

(a)는 이번에 설계한, 미드카인 프로모터를 갖는 온콜리틱 아데노 바이러스의 구조를 모식적으로 나타내는 도면이고, (b)는 3종류의 아데노 바이러스를 상기 각 세포주에 감염시켜 각각의 세포주에서의 E1A 단백질의 발현을 웨스턴 블롯 해석에 의해 검토한 결과이다.

(a)는 3종류의 아데노 바이러스에 의한 암 세포 증식 억제 효과를 비교 검토한 결과이고, (b)는 아데노 바이러스의 E3 영역의 증식 억제 효과에 미치는 영향을 검토한 결과이고, (c)는 직경 5㎜의 누드마우스 피하이식 모델에서의 아데노 바이러스의 항종양 효과를 검토한 결과이다.

미드카인 프로모터를 갖는 온콜리틱 바이러스를 캐리어 세포에 감염시켜 본 발명의 암 유전자 치료약을조제하고, 직경 10 내지 15㎜의 거대 종양에 대한 항종양 효과를 바이러스 단독 투여의 경우와 비교한 결과를나타내는 그래프이다.

아데노 바이러스 AdE3-1A1.3B의 난소암 세포 PA-1에 대한 증식 억제 효과에 대한 Fe의 영향을 검토한결과를 나타내는 그래프이다.

아데노 바이러스 AdE3-1A1.3B의 난소암 세포 PA-1에 대한 증식 억제 효과에 대한 ALA의 영향을 검토한 결과를 나타내는 그래프이다.

아데노 바이러스 AdE3-1A1.3B의 난소암 세포 PA-1에 대한 증식 억제 효과에 대한 Fe 및 ALA 양쪽 존재하의 영향을 검토한 결과를 나타내는 그래프이다.

(a)는 면역 기능이 정상적인 피하 종양 모델 마우스((C57BL/6×C3/He)F1 마우스)를 이용하여, 본 발명의 암 유전자 치료약(면역 처치용 바이러스를 UV 처리하지 않은 경우)의 in vivo 항종양 효과를 검토한 결과이고, (b)는 이 실험에 제공된 각 마우스의 생존율을 장기간 관찰한 결과를 나타내는 그래프이다.

면역 처치용 바이러스 투여로부터 캐리어 세포 투여까지의 투여 간격에 대해 검토를 행한 결과로서,(a)는 각 마우스의 종양 체적을 관찰한 결과, (b)는 각 군 마우스의 생존율을 관찰한 결과이다.

UV로 불활성화 처리한 아데노 바이러스 UV-Ad-β-gal을 면역 처치용 바이러스로 사용함으로써, 상기 투여 간격을 짧게 할 수 있는지 검토한 결과를 나타내는 그래프(서바이벌·커브)이다.

상기 UV-Ad-β-gal을 면역 처치용 바이러스에 사용했을 경우의 당해 바이러스의 투여량에 대해 검토한결과를 나타내는 그래프(종양 성장 커브)이다.

종양 면역의 효과를 검토한 결과로서, (a)는 각 마우스의 종양 체적을 관찰한 결과, (b)는 각 군 마우스의 생존율을 관찰한 결과이다. 각 군의 마우스의 수는 n=5이다. 도면 중, 컨트롤의 「SCC7」, 「OVHM」은 종양 면역을 행하지 않고, 편평 상피 암 세포 SCC7 또는 난소암 세포 OVHM을 1×10개 피하 이식하고 AdE3-1A1.3B감염 캐리어 세포 A549를 투여한 마우스의 결과이다.
「OVHM-RT+Ad-βgal→SCC7, OVHM」은, 방사선 조사한OVHM에 의한 종양 면역 및 Ad-β-gal에 의한 아데노 바이러스에 대한 CTL을 유도한 후에, SCC7 혹은 OVHM의 피하 종양을 작성하여 AdE3-1A1.3B 감염 캐리어 세포 A549를 투여한 마우스의 결과이다.

비소세포성(非小細胞性) 폐암 세포 A549 세포에 의한 종양 면역의 효과를 검토한 결과를 나타내는 그래프(서바이벌·커브)이다.
각 군의 마우스의 수는 n=10이다. 도면 중, 컨트롤의 「OVHM」은 종양 면역을 행하지않고, 난소암 세포 OVHM을 1×10개 피하 이식하고 AdE3-1A1.3B 감염 캐리어 세포 A549를 투여한 마우스의 결과이다. 도면 중 「AdE3-IAI.3B-infected A549→OVHM」은, AdE3-1A1.3B를 감염시켜 방사선 조사한 A549 세포를10개 피하에 면역하고, 난소암 세포 OVHM을 1×10개 피하 이식하여 AdE3-1A1.3B 감염 캐리어 세포 A549를 투여한 마우스의 결과이다.

캐리어 세포와 함께 아테로 콜라겐을 투여했을 경우에, 부작용에 의한 사망률이 개선되는지의 여부를

조사한 결과를 나타내는 그래프이다. 도면 중, 괄호안의 N은 마우스의 수를 나타낸다.

UV로 불활성화 처리하지 않은 아데노 바이러스 Ad-β-gal을 1 내지 3회 투여하여, 항아데노 바이러스항체 존재하에서의 항종양 효과에 대해 검토한 결과로서, (a)는 각 마우스의 종양 체적을 관찰한 결과, (b)는각 군 마우스의 생존율을 관찰한 결과이다. 캐리어 세포에는 A549 세포와 293 세포를 혼합한 것을 사용하였다.각 군의 마우스의 수는 n=5이다.

UV로 불활성화 처리하지 않은 아데노 바이러스 Ad-β-gal을 1 내지 3회 투여하여, 항아데노 바이러스항체 존재하에서의 항종양 효과에 대해 검토한 결과로서, (a)는 각 마우스의 종양 체적을 관찰한 결과, (b)는각 군 마우스의 생존율을 관찰한 결과이다.
캐리어 세포에는 A549 세포만 사용하였다. 각 군의 마우스의 수는n=5이다.

아데노 바이러스 AdE3-1A1.3B 뿐만 아니라 GM-CSF 발현 벡터를 감염시킨 캐리어 세포(A549 세포)를 투여하고, 이 캐리어 세포와 함께 아테로 콜라겐을 투여했을 경우의 in vivo 항종양 효과에 대해 검토한결과로서, (a)는 각 마우스의 종양 체적을 관찰한 결과, (b)는 각 군 마우스의 생존율을 관찰한 결과이다. 도면중, 「Ad-β-gal」 앞의 「×1」, 「×2」, 「×3」은 각각 아데노 바이러스 Ad-β-gal을 1회, 2회, 3회 투여한것을 나타낸다. 각 군의 마우스의 수는 n=5이다.

캐리어 세포 투여시에, 철제(鐵劑)를 복강 내 투여했을 경우의 in vivo 항종양 효과에 대해 검토한 결과로서, (a)는 각 마우스의 종양 체적을 관찰한 결과, (b)는 각 군 마우스의 생존율을 관찰한 결과이다. 도면중, 「Ad-β-gal」 앞의 「×1」, 「×2」, 「×3」은 각각 아데노 바이러스 Ad-β-gal을 1회, 2회, 3회 투여한것을 나타낸다. 각 군의 마우스의 수는 n=5이다.

캐리어 세포 A549에 대해 행하는 방사선 처리에서 조사하는 선량에 대해, 누드마우스를 이용하여 검토

한 결과를 나타내는 그래프이다.

(C57BL/6×C3/He)F1 마우스에 OVHM을 피하 이식한 실험에서, 캐리어 세포 A549를 상이한 선량으로 방사

선 처리했을 경우의 항종양 효과에 대해 검토한 결과를 나타내는 그래프이다.

캐리어 세포 A549에 대한 온콜리틱 바이러스의 감염량에 대해 검토한 결과를 나타내는 그래프이다.

난소암 세포 OVHM에 의한 종양 면역의 효과를 검토한 결과로서, (a)는 각 마우스의 종양 체적을 관찰한

결과, (b)는 각 군 마우스의 생존율을 관찰한 결과이다. 도면 중, 「A549」는 종양 면역 없이 AdE3-1A1.3B 감염

캐리어 세포 A549를 3회 투여한 마우스, 「OVHM-RT→A549」는 방사선 조사한 OVHM에 의한 종양 면역 후, AdE3-

1A1.3B 감염 캐리어 세포 A549를 3회 투여한 마우스, 각 군의 마우스의 수는 n=5이다.

 발명의 명칭 : 암 유전자 치료약

등록번호: 2004288060000

출원일: 2006-04-13

등록일: 2003-10-15

등록 권리자: 자이단호우진 신산쿄소우조우 켄큐키코

발명자: 하마다 카츠유키, 코토 아키노부, 사라카와 토시로,

대리인: 이래호


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